Выявление эритроцитарного антигена D

Реакция агглютинации на плоскости с применением моноклонального реагента для обнаружения полных антител

Лабораторное тестирование для определения фактора Резус проводят в светлом помещении при условии комнатной температуры. Для исследования берут образцы, насыщенные эритроцитами — цельную кровь, эритрокомпоненты.

Тестирование проходит поэтапно:

  • на планшет капают реагент (0,1 мл) и эритроциты (0,03 мл);
  • эритроциты смешивают с реагентом при помощи стеклянной палочки;
  • планшет несколько раз покачивают.

Выраженная агглютинация происходит через 30 сек., результат реакции готов через 180 сек.

Ошибки в тестировании — причины нарушений:

  • погрешности в технике проведения теста — ошибочное маркировка образцов крови, количество эритроцитов не соответствует количеству сыворотки;
  • биологические данные эритроцитов и реагентов — слабые варианты антигенов, «монетные столбики», посторонние тепловые или холодовые антитела, «панагглютинирующая» или аутоагглютинирующая кровь, отсутствие агглютинатов α и β;
  • некачественные реагенты — примеси бактерий, низкий титр сыворотки (менее 1:32).

Обнаружение полных и неполных антител осуществляется при помощи комплекта реагентов анти-D IgG: выявление неполных антител путем желатиновой конглютинации или пробы Кумбса, порядок проведения представлен на сайте http://www.isoseroclon.ru/novelties/article-9738/ и анти-D Супер (тест с агглютинацией на плоскости для исследования на полные антитела).

Положительный резус–фактор фиксируется по наличию реакции агглютинации. Если реакции не происходит, резус-фактор считается отрицательным.

Типы реакции обозначаются знаком +, ++, +++ и ++++ и варьируются от сомнительной до крупнодисперсной агглютинации. Слабая агглютинация — признак эритроцитов с минорным антигеном Du. Сомнительный результат проверяется повторным тестом с реагентом, содержащим IgG неполные анти-D антитела.

Реакция агглютинации с участием IgG неполных анти-D антител: использование высокомолекулярной субстанции

Исследование выполняется посредством агглютинации на плоскости или конагглютинации с желатином. В первом случае (D-)эритроциты могут вступать в ложную реакцию с высокомолекулярными веществами. Достоверный результат обеспечивает тест с контрольным раствором высокомолекулярной субстанции или моноклональным реагентом (содержащим полные IgM антитела).

Желатиновая конагглютинация выполняется в пробирке:

  • образец крови (0,05 мл) или взвесь эритроцитов в сыворотке (1/2) смешивается с 10-процентным раствором желатина (0,1 мл);
  • добавляют анти-D реагент (0,1 мл или 2 капли);
  • исследуемую смесь 10 минут прогревают на «водяной бане» при температуре 37 ˚С;
  • вводят физраствор (5-8 мл), перемешивают путем переворачивания пробирки.

Реакция агглютинации определяется по виду жидкости — при Rh- жидкость имеет ровный цвет без агрегатов, при Rh+ агрегаты отчетливо визуализируются. Если желатин не вызывает агглютинацию, результат проведения реакции признается верным.

Добавить комментарий

Top